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    MicBio-II酶標板恒溫振蕩器在禽肉中氯霉素藥殘的快速檢測使用

    發布時間:2011-01-07   點擊次數:3801次

     

    近年來,在對外出口畜禽食用產品時,對氯霉素殘留的檢測成為*的檢測指標。國外一般要求畜禽食用產品中氯霉素不得超過1 ng/ml,這對檢測手段的靈敏度提出了很高的要求。目前我國國內常用的檢測氯霉素藥殘的方法是使用液相法或氣相色譜法來對其進行檢測,但這種檢測方法對樣品的處理比較復雜,對實驗操作技術要求很高,不利于在基層生產單位推廣應用。本實驗根據酶聯免疫吸附(ELIsA)借助于氯霉素殘留快速檢測試劑盒對雞肉組織殘留的氯霉素進行檢測,處理簡單,操作步驟簡便,可以快速有效地測定出肉品中的氯霉素殘留量,其對氯霉素檢測的靈敏度可以達到
    0.03 ng/ml的水平。
    1 材料
    1.1 被檢樣品市場上隨機抽取的雞肉樣品,共92份。
    1.2 快速檢測試劑盒購自合肥艾本森科學儀器有限公司,美國Neogen公司生產,其組成為:(1)酶標板,氯霉素抗體包被;(2)氯霉素標準溶液;(3)酶標結合物;(4)酶標結合物稀釋液;(5)底物溶液;(6)
    反應終止液;(7)標樣/試樣稀釋液;(8)清洗液。以上各試劑4"C保存,使用時回升至室溫。MicBio-II酶標板恒溫振蕩器,ABSON公司生產,
    2 檢測方法
    2.1 肉樣的處理方法(1)從被檢測的肉樣中取5 g樣品放入研缽中研磨成肉漿,用量筒量取20 ml PBS
    緩沖液(pH7.2)倒入肉漿中,然后將其倒入5mI大離心管中。(2)將離心管在震蕩器上劇烈震蕩1 min,使PBS緩沖液充分發揮作用。(3)在15℃的條件下以3 000轉/min,離心15 min。(4)離心后取0.2 ml上
    層液用0.2 ml標樣/試樣稀釋液稀釋。
    2.2 檢測程序按照1:100稀釋酶標結合物。用移液管移取100 uL經過稀釋的氯霉素標準液或樣品到相應的微量滴定板孔中,每孔中再加入50uL經過稀釋的酶標結合物。蓋上塑料膜后,將酶標板放入MicBio-II酶標板恒溫振蕩器,溫育120 min。洗板3次:向每個孔中加入300uL清洗液,倒掉孔中的溶液,然后在紙巾上拍擊酶標板,重復以上步驟3次(如果沖洗不完全會影響檢測結果)。向反應孔中加入100 uL底物溶液,進行顯色反應。讓反應在室溫下暗處充分進行30 min。到時間后向反應孔中加入100uL 1 M 的硫酸(反應終止液),顏色由蘭色變成黃色。充分混勻后,用酶標儀在450 nm 波長處檢測吸光度(OD值)。顏色在30 min內穩定。
    3 結果
    根據酶標儀測定數據,將各樣品吸光度與氯霉素標準溶液的吸光度對比,有20個樣品氯霉素含量在低
    于0.5ng/g,有28個肉樣氯霉素含量在0.5~1.0ng/g之間,有l8個肉樣氯霉素含量在1~5ng/g之間,有16個肉樣氯霉素含量在5~10ng/g之間有,7個肉樣氯霉素含量在10~50ng/g之間,有3個肉樣的氯霉素含量大于50ng/g,被檢92份雞肉樣品中47.83%的樣品氯霉素含量超標(≥1 ng/g)。
    4 討論
    氯霉素是一種廣譜抗生索,具有較強的抗菌殺菌作用,由于價格比較便宜且治療效果比較明顯,過去在畜禽養殖中被廣泛應用。但食品中氯霉素對人體的縫康會造成嚴重的影響,如再生障礙性貧血及粒狀細胞缺乏癥,新生兒、早產兒灰嬰綜合征等。因此,聯合國糧農組織/世界衛生組織食品添加劑專家委員會建議禁止此藥使用于食用動物,美國、加拿大以及歐共體各國已嚴格控制將其用于食用動物。由于歷史的原因,目前我國應用含有氯霉素成分的藥物仍不在少數。為了維護人體健康,擴大我國的肉制品外貿出口,徹底解決氯霉素在畜禽肉制品以及水產品中的殘留問題,除用藥、制定動物的停藥期外,也需要加強檢測研究。肉類產品巾微生物檢測法,檢出氯霉素的zui低濃度為0.25~5.00 ng/ml。氣相或液相色譜的測定靈敏度雖能達到10 n g/ml,但其對樣品的處理比較復雜,對實驗操作人員的要求很高,穩定性與重復性均比較差,不利于在基層生產單位推廣應用。應用ELISA法檢測氯霉素殘留的靈敏度可達0.03 ng/ml的水平,是常規方法的數百倍,而且操作簡便,檢測迅速。本方法不僅可用于各種肉制品中氯霉素殘留的檢測,而且可以用來檢測牛奶、蜂蜜、奶粉等,且結果穩定,重復性好,值得推廣應用。

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